Métodos de prueba para la detección de Bacillus subtilis
B. subtilis
Bacillus subtilises un microorganismo común que se utiliza a menudo en la industria de los piensos, en concreto en su producción y también como aditivo tras la producción. Su detección es crucial para garantizar la calidad y la seguridad de los piensos. A continuación se ofrece una introducción detallada a los distintos métodos de detección, condiciones y estándares de prueba paraBacillus subtilisEn piensos. Cada método tiene sus propias ventajas y desventajas, por lo que el usuario debe tener en cuenta la situación específica y el escenario de aplicación.
Método de cultivo tradicional
Procesamiento de la muestra: Pesar una cierta cantidad de muestra, agregar diluyente para mezclar y tratamiento ultrasónico para asegurar la liberación y dispersión deBacillus subtilis.
Dilución: Diluya en gradiente la muestra procesada para garantizar que cada dilución de la muestra pueda cubrirse uniformemente en el medio de cultivo.
Inoculación: Aplicar la muestra diluida en una placa de agar nutritivo, etiquetar el número de análisis, la fecha y el nivel de dilución.
Cultivo: Coloque las placas inoculadas en una incubadora de temperatura constante a 37 ℃ durante 16-20 horas y observe el crecimiento de colonias bacterianas.
Observación de las características de las colonias: Las colonias deBacillus subtilisGeneralmente presentan formas rugosas e irregulares en medios de cultivo sólidos, con colonias más grandes de color blanco lechoso a blanco grisáceo.
Identificación bioquímica: A través de una serie de pruebas bioquímicas como la prueba de oxidasa, la prueba de enzima catalítica, la prueba de licuefacción de gelatina y la prueba de reducción de nitrato, confirme además si las bacterias aisladas sonBacillus subtilis.
Método de biología molecular
Detección por PCR: La presencia deBacillus subtilisSe detecta amplificando su secuencia genética específica mediante la reacción en cadena de la polimerasa (PCR). Este método tiene una alta sensibilidad y una fuerte especificidad, pero requiere equipos costosos y conocimientos profesionales.
PCR cuantitativa de fluorescencia (qPCR): detección cuantitativa de la presencia deBacillus subtilismediante la amplificación de secuencias genéticas específicas, con alta sensibilidad y especificidad, pero que también requiere equipo profesional y conocimientos operativos.
Métodos inmunológicos
Ensayo inmunoabsorbente ligado a enzimas (ELISA): Refleja indirectamente el contenido deBacillus subtilisAnticuerpos específicos en una muestra mediante la detección de su reacción de unión con antígenos. Este método tiene una alta sensibilidad, pero puede verse afectado por la calidad de los reactivos y los procedimientos experimentales.
Método de perlas inmunomagnéticas: uso de perlas inmunomagnéticas para capturar específicamenteBacillus subtilisy luego realizar la detección. Este método también tiene alta sensibilidad y especificidad, pero la operación es más compleja.
