¿Cuál es el método de detección de la actividad de la proteasa alcalina?
¿Cuál es el método de? Proteasa alcalina ¿detección de actividad?
La actividad enzimática se refiere a la capacidad de una enzima para catalizar ciertas reacciones químicas. La magnitud de la actividad enzimática puede expresarse por la velocidad de una reacción química que cataliza en condiciones adecuadas. Medición de la actividad de Liaoning.Proteasa alcalinaLa enzima mide la velocidad de la reacción química catalizada por ella. La velocidad de la reacción enzimática puede expresarse por la disminución del sustrato de reacción o el aumento del producto por unidad de tiempo. Por motivos de sensibilidad, se suele medir la cantidad de producto producido por unidad de tiempo. Dado que la velocidad de la reacción enzimática puede disminuir gradualmente con el tiempo, para medir correctamente la actividad enzimática, es necesario determinar la velocidad inicial de la reacción enzimática.
Principio deProteasa alcalinaPrincipio de determinación de la actividad del método de Folin
Proteasa alcalinaPuede catalizar la hidrólisis de caseína a tirosina en condiciones alcalinas. La tirosina es un aminoácido que contiene un grupo hidroxilo fenólico y puede reaccionar con Folin (una mezcla de ácido fosfotúngstico y ácido fosfomolíbdico). (Reacción de Folin-fenol: El reactivo de Folin es extremadamente inestable en condiciones alcalinas y se reduce cuantitativamente con facilidad mediante compuestos fenólicos para producir una mezcla de azul de tungsteno y azul de molibdeno, que muestra una tonalidad de azul diferente). Mediante colorimetría, se puede determinar la cantidad de tirosina producida y la cantidad de tirosina producida por la hidrólisis de caseína mediante Liaoning.Proteasa alcalinaen una unidad de tiempo se utiliza para expresar la actividad enzimática, calculando así la actividad enzimática.
Procedimiento experimental para la determinación deProteasa alcalinaactividad
Preparación de la solución enzimática: pese con precisión 1 g (±0,001) de polvo de enzima seco, agregue 10 ml de solución tampón (2.2.5), disuelva en un vaso de precipitados pequeño y revuelva con una varilla de vidrio. Después de reposar un rato, vierta con cuidado la solución de la capa superior en un matraz aforado. En el medio, agregue una pequeña cantidad de solución tampón a la parte del sedimento, revuelva y disuelva 4 veces de esta manera y finalmente transfiera todo a un matraz aforado de 100 ml. Complete hasta la marca con solución tampón, agite bien y filtre con cuatro capas de gasa. Extraiga 5 ml del filtrado, transfiéralo a un matraz aforado de 100 ml, diluya hasta la marca con agua destilada y diluya el líquido enzimático con un nivel de 2000 veces.
Definición deProteasa alcalinaactividad
Definición deProteasa alcalinaunidad de actividad: 1 gramo deProteasa alcalinaEl polvo puede producir 1 microgramo de tirosina por minuto en condiciones de pH 10 y 40 °C, lo que se considera una unidad de actividad enzimática.
Precauciones para la determinación deProteasa alcalinaactividad
1. La temperatura, el pH y el tiempo de la reacción enzimática tienen un impacto directo en el número de enlaces peptídicos hidrolizados, por lo que debe controlarse estrictamente.
2. Una vez terminada la reacción con ácido tricloroacético, el filtrado obtenido al filtrar la mezcla de reacción debe ser transparente.
3. Debido a que el reactivo Folin es sensible a los ambientes ácidos y propenso a fluctuaciones, se requiere un orden de medición. Es necesario agregar una solución de carbonato de sodio para crear un ambiente alcalino y luego agregar el reactivo Folin para que funcione correctamente.
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